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这个第三问最后

你要把cDNA插入到载体上去，cDNA和启动子的5‘-3’方向（正义链）需要一致，那么cDNA两端需要增加序列，与反义链突出的粘性末端配对。
话说是不是应该选EcoRI和HindIII双酶切

感谢你的题目让我也复习了一遍，平常构建质粒的时候也没考虑这么多，我也详细整理了一下。
先回顾一下转录的方向：

这道题里的mRNA序列为（中间未知省略的用“NNNNNN”代替）：
5’-UGAACG NNNNNN GACUCG-3‘
那么逆转录出来的cDNA就是：
5’-TGAACG NNNNNN GACTCG-3’
3‘-ACTTGC NNNNNN CTGAGC-5‘
插入载体所需要的含黏性末端片段为：
5’- AATTG TGAACG NNNNNN GACTCG A ·········-3’
3‘- ········C ACTTGC NNNNNN CTGAGC TTCGA -5‘
酶切前的PCR产物应为：
5’-CAATTG TGAACG NNNNNN GACTCG AAGCTT-3’
3‘-GTTAAC ACTTGC NNNNNN CTGAGC TTCGAA-5‘
所以与cDNA匹配的引物为：
···············································3‘AGC TTCGAA-5‘
5’- TGAACG NNNNNN GACTCG -3’
3‘- ACTTGC NNNNNN CTGAGC -5‘
5’-CAATTG TGA-3’
如有错误还请吧友指正