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钩藤碱含量测定方法

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钩藤碱是从茜草科植物钩藤的带钩的枝条上提取出来的一种吲哚类生物碱,它的化学式为C22H28N2O4,分子量为384.46,可溶于氯仿、乙醇、丙酮,微溶于乙醚和醋酸乙酯,几乎不溶于石油醚。钩藤碱具有多种生物 活性,比如抗炎,保护神经等作用。除此之外,还有异去氢钩藤碱,去氢钩藤碱,异钩藤碱等。《本草征要》中记载,钩藤具有"舒筋除眩,下气宽中。"的作用。

实验室检测钩藤碱的含量,主要通过高效液相色谱法(HPLC)进行分离和测定。
1.样品处理
就是从中药材钩藤中将钩藤碱给提取到溶液中,便于后续的HPLC的测定。之前我们了解过,钩藤碱是可溶于氯仿、乙醇、甲醇等有机溶剂。因此,就需要将样品进行粉碎后,加入甲醇溶剂,在超声波的作用下提取。如甲醇浸提24h,超声30min,0.45um膜过滤待测。

2.色谱条件
C18色谱柱,250x4.6mm,5um;柱温28℃。紫外检测器,波长254nm。以甲醇和水(55:45)为流动相,等度洗脱,流速为1.0ml/min,进样量10-20uL(根据杂质的程度选择适当的进样量)。

3.标准曲线
准确称取5mg的钩藤碱标准品,用甲醇溶液进行溶解,定容到5mL得到1mg/mL的标准母液。然后,用甲醇进行梯度稀释6个浓度点,在检测限的范围内。在进样之前,要对溶液进行脱气处理。以上述的色谱条件,进样到HPLC,记录出峰的时间和峰图。对峰面积进行积分处理,并结合对应的标准溶液浓度,拟合出来标准曲线,得到回归方程,相关系数r2要大于0.999并接近于1。
4.含量计算
将样品溶液进样到HPLC中,根据色谱峰的保留时间,识别出目标色谱峰。对色谱峰面积进行手工或自动积分,代入到回归方程,可以计算出样品溶液中的钩藤碱含量。


IP属地:上海1楼2025-05-26 15:30回复